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本发明公开了一种适于棉花的生物刺激素复配剂及其制备方法和应用。生物刺激素复配剂由氨基酸、聚谷氨酸、腐植酸钾和水组成，其制备步骤是：1)发酵制备聚谷氨酸发酵液，然后对进行紫外灭活；2)制备可溶解于水的腐植酸钾；3)将氨基酸粉加入到聚谷氨酸溶液中；4)将制备的腐植酸钾加入到3中的溶液中，超声振荡器乳化，形成悬浮的生物刺激素复配剂。该生物刺激素复配剂在苗期叶面喷施1‑2次，能够保苗壮苗；蕾期叶面喷施1‑2次，能够促进现蕾；花期叶面喷施1‑2次，能够减少花蕾脱落；铃期叶面喷施2‑3次，能够促进棉铃发育、提高单铃重；全生育叶面喷施3‑4次，能够促进棉株生长，提高抗逆能力，调节营养生长与生殖生长平衡，提高单株成铃数，提高产量。