本申请提供一种田间快速评价棉花对草甘膦耐受性的方法，所述方法包括：播种待测棉花种子，且播种对草甘膦敏感的棉花种子作为对照；棉花苗期，向待测棉花和对照棉花喷施草甘膦；喷施草甘膦后第1天开始，采用分级目测法，每天调查对照棉花的药害发生情况并计算对照棉花的药害指数；当对照棉花的药害指数等于或大于50时，采用相同的分级目测法，调查待测棉花的药害发生情况并计算待测棉花的药害指数；根据待测棉花的药害指数和对照棉花的所述等于或大于50的药害指数计算待测棉花的相对药害指数，且根据计算得到的相对药害指数评价待测棉花对草甘膦的耐受性。所述方法占用空间小、耗时短、成本低、准确性高且重复性好。